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電泳遷移率檢測(cè)是轉(zhuǎn)錄因子研究的經(jīng)典方法

更新時(shí)間:2021-06-27   點(diǎn)擊次數(shù):1956次
  帶電粒子在單位時(shí)間內(nèi)移動(dòng)的距離稱為電泳遷移率。凝膠遷移或電泳遷移率檢測(cè)(ElectrophoreticMobilityShiftAssay,EMSA)是一種檢測(cè)蛋白質(zhì)和DNA序列相互結(jié)合的技術(shù),可用于定性和定量分析;目前已用于研究RNA結(jié)合蛋白和特定的RNA序列的相互作用,是轉(zhuǎn)錄因子研究的經(jīng)典方法。
  凝膠遷移實(shí)驗(yàn)又稱凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)或電泳遷移率實(shí)驗(yàn)(EMSA,electrophoreticmobilityshiftassay),是目前研究核酸與蛋白質(zhì)相互作用的一種重要實(shí)驗(yàn)手段,常用于轉(zhuǎn)錄因子與啟動(dòng)子相互作用的驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)。該實(shí)驗(yàn)利用核酸與蛋白結(jié)合后,在非變性聚丙烯酰氨凝膠中電泳的遷移速率會(huì)明顯降低的原理,通過(guò)設(shè)計(jì)特異性和非特異性的探針,通過(guò)孵育與目標(biāo)蛋白結(jié)合,形成探針-蛋白復(fù)合體,由于分子量變大,在聚丙烯酰氨凝膠中的電泳遷移速率下降,相比于未結(jié)合的探針會(huì)出現(xiàn)滯后效應(yīng),再通過(guò)探針上特殊的標(biāo)記物性質(zhì),通過(guò)轉(zhuǎn)膜、顯色或曝光,探針-蛋白復(fù)合體所在的位置便能形成條帶,從而證明核酸與蛋白的相互作用。目前隨著實(shí)驗(yàn)技術(shù)的改進(jìn),能夠定性和定量的完成實(shí)驗(yàn)。
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