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蛋白 Pull Down(蛋白和蛋白互作)

更新時間:2024-08-07

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廠商性質:生產廠家

生產地址:

簡要描述:
Halo Pull Down(蛋白和蛋白互作)技術是將Halo標簽的融合蛋白固相化到磁珠上,與細胞總蛋白進行孵育,鑒定與之相互作用的蛋白。該方法可以鑒定與已知蛋白相互作用的未知蛋白,也可以鑒定兩個已知蛋白間是否存在相互作用。
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蛋白Pull down技術將目標蛋白進行體外原核表達,使標簽蛋白(Halo、GST、His等)與目標蛋白融合表達,可以不受抗體、物種限制僅借助標簽的親和介質將目標蛋白純化出來,目標蛋白在純化過程中可以將與其能夠發(fā)生作用的蛋白“下拉”下來,進而利用蛋膠、Western Blot或者質譜鑒定拉下來的蛋白質,這些蛋白即與目標蛋白相互作用的蛋白。蛋白Pull down實驗還可以通過外源同時表達目標蛋白和待測蛋白,利用Pull down點對點的確定它們是否發(fā)生直接的相互作用,也可以僅表達蛋白質的結合區(qū)域進行蛋白Pull down,確定兩個蛋白結合的結構域。

本公司主要提供Halo/GST-tag pull down:Halo-tag pull down是使用體外真核表達系統(tǒng)來表達目的蛋白,表達的目的蛋白攜帶Halo標簽;GST-tag pull down是使用大腸桿菌誘導表達目的蛋白,表達的目的蛋白攜帶GST標簽,也可以利用其它標簽蛋白進行pull down實驗。

Halo/FLAG-tag pull down技術優(yōu)勢:

真核表達系統(tǒng),蛋白更接近體內結構

沒有細胞內干擾因素的限制,表達成功率高

蛋白表達載體構建成功后,不需要轉化和鑒定,可直接表達目的蛋白,節(jié)省時間

步驟 內容 交付內容 周期
載體構建
  • 客戶提供目的蛋白對應的CDS的序列或質粒,

  • 克隆至合適的表達載體,

  • 質粒測序,

  • 質粒制備。

測序結果 1-2周
無細胞表達+純化
  • 用小麥芽胚蛋白表達體系進行蛋白表達,

  • 蛋白表達評估 (Western Blot) 。

表達評估報告 1周
Pull Down
  • 細胞裂解,

  • 目的蛋白和總蛋白孵育,

  • 洗脫與目的蛋白結合的蛋白。

銀染結果 1周
質譜檢測
  • 將洗脫的蛋白進行質譜鑒定。

質譜結果 2周

 

客戶提供材料 交付結果

新鮮樣本(組織或者細胞):細胞數量>2.7ⅹ107;

組織樣本>3g

載體測序結果

實驗過程圖

質譜結果

蛋白Pull Down 技術流程

 

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蛋白Pull Down結果示例

結果.pngGO結果.pngKEGG結果.png

蛋白Pull Down應用案例

2023年12月,北京林業(yè)大學和藍景科信合作,在植物學主流學術期刊Plant Stress(IF=5.0)上,發(fā)表了題為“Populus euphratica CPK21 interacts with heavy metal stress-associated proteins to mediate Cd tolerance in Arabidopsis”的研究成果。該研究借助HaloTag pull-down技術鑒定了胡楊CPK21的互作蛋白,為揭示胡楊CPK21調控植物Cd耐受的分子機制研究提供了技術支撐。

 

 

 

 

 

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