更新時間:2024-08-07
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蛋白Pull down技術將目標蛋白進行體外原核表達,使標簽蛋白(Halo、GST、His等)與目標蛋白融合表達,可以不受抗體、物種限制僅借助標簽的親和介質將目標蛋白純化出來,目標蛋白在純化過程中可以將與其能夠發(fā)生作用的蛋白“下拉”下來,進而利用蛋膠、Western Blot或者質譜鑒定拉下來的蛋白質,這些蛋白即與目標蛋白相互作用的蛋白。蛋白Pull down實驗還可以通過外源同時表達目標蛋白和待測蛋白,利用Pull down點對點的確定它們是否發(fā)生直接的相互作用,也可以僅表達蛋白質的結合區(qū)域進行蛋白Pull down,確定兩個蛋白結合的結構域。
本公司主要提供Halo/GST-tag pull down:Halo-tag pull down是使用體外真核表達系統(tǒng)來表達目的蛋白,表達的目的蛋白攜帶Halo標簽;GST-tag pull down是使用大腸桿菌誘導表達目的蛋白,表達的目的蛋白攜帶GST標簽,也可以利用其它標簽蛋白進行pull down實驗。
Halo/FLAG-tag pull down技術優(yōu)勢:
真核表達系統(tǒng),蛋白更接近體內結構
沒有細胞內干擾因素的限制,表達成功率高
蛋白表達載體構建成功后,不需要轉化和鑒定,可直接表達目的蛋白,節(jié)省時間
步驟 | 內容 | 交付內容 | 周期 |
載體構建 |
| 測序結果 | 1-2周 |
無細胞表達+純化 |
| 表達評估報告 | 1周 |
Pull Down |
| 銀染結果 | 1周 |
質譜檢測 |
| 質譜結果 | 2周 |
客戶提供材料 | 交付結果 |
新鮮樣本(組織或者細胞):細胞數量>2.7ⅹ107; 組織樣本>3g | 載體測序結果 實驗過程圖 質譜結果 |
蛋白Pull Down結果示例
蛋白Pull Down應用案例
2023年12月,北京林業(yè)大學和藍景科信合作,在植物學主流學術期刊Plant Stress(IF=5.0)上,發(fā)表了題為“Populus euphratica CPK21 interacts with heavy metal stress-associated proteins to mediate Cd tolerance in Arabidopsis”的研究成果。該研究借助HaloTag pull-down技術鑒定了胡楊CPK21的互作蛋白,為揭示胡楊CPK21調控植物Cd耐受的分子機制研究提供了技術支撐。
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