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CUT-Tag技術(shù)服務(wù)-研究DNA與蛋白互作

更新時(shí)間：2024-08-07

訪問(wèn)量：1874

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

生產(chǎn)地址：

簡(jiǎn)要描述：

CUT-Tag互作技術(shù)服務(wù)是研究DNA與蛋白互作的新技術(shù)。與ChIP-Seq相比，CUT-Tag不需要甲醛交聯(lián)和免疫共沉淀的過(guò)程，而是通過(guò)靶蛋白的抗體和Protein A的介導(dǎo)，使Protein A融合的Tn5轉(zhuǎn)座酶靶向并切割DNA，同時(shí)在序列兩端加上測(cè)序接頭，經(jīng)PCR擴(kuò)增后形成高通量測(cè)序文庫(kù)。

產(chǎn)品介紹：

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CUT-Tag互作技術(shù)服務(wù)-研究DNA與蛋白互作（Cleavage Under Targets and Tagmentation）是研究DNA與蛋白互作的新技術(shù)。與ChIP-Seq相比，CUT&Tag不需要甲醛交聯(lián)和免疫共沉淀的過(guò)程，而是通過(guò)靶蛋白的抗體和Protein A的介導(dǎo)，使Protein A融合的Tn5轉(zhuǎn)座酶靶向并切割DNA，同時(shí)在序列兩端加上測(cè)序接頭，經(jīng)PCR擴(kuò)增后形成高通量測(cè)序文庫(kù)。

（CUT-Tag互作技術(shù)服務(wù)-研究DNA與蛋白互作）實(shí)驗(yàn)流程圖

CUT&Tag流程圖.png

細(xì)胞與ConA beads結(jié)合——細(xì)胞滲透性處理——一抗與目的蛋白特異性結(jié)合——二抗結(jié)合一抗放大信號(hào)——加入pA-Tn5與抗體結(jié)合——通過(guò)Mg2+激活轉(zhuǎn)座體，片段化目的蛋白結(jié)合的DNA，并加上接頭序列——DNA提取與擴(kuò)增-高通量測(cè)序

客戶提供材料

實(shí)驗(yàn)過(guò)程圖

凍存細(xì)胞：細(xì)胞數(shù)>10萬(wàn)

凍存組織：組織量>40 mg

一抗（請(qǐng)使用ChIP級(jí)別的一抗，提供未稀釋的抗體原液，

送樣前請(qǐng)將抗體的說(shuō)明書(shū)發(fā)給我們，以便安排后續(xù)實(shí)驗(yàn)

高通量測(cè)序原始數(shù)據(jù)

生物信息學(xué)分析結(jié)果

使用CUT&Tag，鑒定H3K27me3在染色質(zhì)水平上的peaks。與ChIP-seq相比，在相同Reads條件下，兩者的Peaks一致，并且CUT&Tag的信噪比更高、背景更低。

參考文獻(xiàn)：

Kaya-Okur HS, Wu SJ, Codomo CA, Pledger ES, Bryson TD, Henikoff JG, Ahmad K, Henikoff S. CUT&Tag for efficient epigenomic profiling of small samples and single cells. Nat Commun. 2019 Apr 29;10(1):1930. doi: 10.1038/s41467-019-09982-5.

CUT&Tag，DAP-seq，ChIP-seq技術(shù)對(duì)比
技術(shù)名稱	CUT&Tag	DAP-seq	ChIP-seq
實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｊ?/td>	體內(nèi)	體外	體內(nèi)
是否需要特異性抗體	是	否	是
樣本適用性	對(duì)細(xì)胞活性要求高，不兼容冷凍樣本，能夠?qū)O少量樣品進(jìn)行分析	所有物種，各種組織器官，新鮮組織、凍存組織皆可	所有物種，各種組織器官，新鮮組織、凍存組織皆可
信噪比	背景噪音低，所需測(cè)序深度少	噪音高，所需測(cè)序量相對(duì)較多	噪音高，所需測(cè)序量相對(duì)較多